犬血浆中泮托拉唑对映异构体的纤维素手性色谱柱LC-MS/MS法测定

DeterminationofPantoprazoleEnantiomersinDogPlasmabyLC-MS/MSUsingaCelluloseChiralChromatographicColumn

曹晓丽1,2，昝斌2，陈笑艳2，钟大放1,2*

(1.浙江工业大学药学院，浙江杭州；2.中国科学院上海药物研究所上海)

CAOXiaoli1,2,ZANBin2,CHENXiaoyan2,ZHONGDafang1,2*

(1.CollegeofPharmacy,ZhejiangUniversityofTechnology,Hangzhou;

2.ShanghaiInstituteofMateriaMedicaChineseAcademyofSciencesShanghai)

摘要：建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定犬血浆中的泮托拉唑(1)对映异构体，并应用于1在Beagle犬体内立体选择性药动学研究。采用d5-1作内标，使用LuxCellulose-4手性色谱柱。质谱采用电喷雾电离源(ESI源)，多反应监测模式(MRM)，监测离子对m/z.2→m/z.0(1)和m/z.1→m/z.1(d5-1)。犬血浆样品中(S)-1和(R)-1在2～ng/ml范围内线性关系良好。Beagle犬立体选择性药动学研究结果表明，单独给药或以外消旋体给药时，(S)-1和(R)-1在Beagle犬体内的药动学行为基本一致。对映体单独给药后，血浆中未检测到其异构体，表明未发生构型转化。关键词：泮托拉唑；对映异构体；液相色谱-串联质谱；药动学

泮托拉唑(pantoprazole，1)是选择性长效质子泵抑制剂，主要用于治疗胃、十二指肠溃疡和反流性食管炎等胃肠道疾病[1—2]。1结构中含有一手性

硫原子，存在(S)-和(R)-型对映异构体。药效学研究表明，(S)-1具有明显的抗溃疡作用，作用强于其消旋体和(R)-1[3]。根据规定，对于手性药物应研究对映体转化为另一对映体的程度是否显著，以及该对映体单独用药是否与其作为外消旋体组分时的药动学性质一致。

有研究采用HPLC-UV法、LC-MS/MS法测定血浆中的1对映体(表1)[4—6]，但色谱运行时间较长(10min)。纤维素手性色谱柱因其具有多种互

补的多糖衍生物手性固定相，使得手性分离方法的开发更简单易行[7—8]。基于此，本研究建立了快速、灵敏的LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中的1对映异构体，参考相关指导原则进行了方法学验证，并应用于Beagle犬的立体选择性药动学试验。

1仪器与试药

2方法与结果

2.1溶液配制

2.2血浆样品预处理

2.3色谱、质谱条件

2.3.1色谱条件

2.3.2质谱条件

2.4专属性试验

分别取6只Beagle犬空白血浆和1份溶血空白血浆(犬空白全血∶犬空白血浆=1∶49)，按“2.2”项下方法处理，其中内标溶液以甲醇25μl代替，进样测定；取相应犬空白血浆和溶血空白血浆配制的最低检测限(LLOQ)样品、Beagle犬静注(S)-1或(R)-1钠盐(2mg/kg)45min后的血样，和静注1钠盐(4mg/kg)30min后的血样，按“2.2”项下方法处理后进样，记录色谱图(见图1)。可见，空白犬血浆中的内源性物质不干扰(S)-1、(R)-1和内标2的测定。

2.5线性试验

2.6精密度与准确度试验

按“2.5”项下方法分别制备低、中、高浓度质控血样[(S)-1、(R)-1浓度分别为6、和3ng/ml]，-20℃贮存备用。分别取上述质控血样25μl，各6份，按“2.2”项下方法处理后进样测定，连续测定3d，根据当日标准曲线计算本法的日内、日间RSD，结果见表2。

2.7回收率试验和基质效应

2.8稳定性试验

按“2.6”项下方法分别配制低、高浓度质控血样，分别考察血样于室温放置6h、冻-融3次、?20℃冷冻放置39d以及血样提取后置于自动进样器(4℃)放置24h的稳定性。结果表明，在上述条件下血浆样品中(S)-1、(R)-1均稳定。结果见表3。

2.9药动学试验

2.9.1试验设计、给药及样品采集

2.9.2药-时曲线及药动学参数

Beagle犬分别静脉给予注射用(S)-1钠盐1、2和4mg/kg，以及(S)-1钠盐2mg/kg、(R)-1钠盐2mg/kg和1钠盐4mg/kg的药-时曲线见图3，主要药动学参数见表4。可见，对映体单独给药或以外消旋体给药时，(S)-1和(R)-1在Beagle犬体内的药动学行为基本一致

2.9.3对映体的相互转化

3讨论

稳定同位素内标由于与待测物具有几乎完全一致的化学性质，可以校正待测物在样品提取和LCMS/MS分析中引起的波动。但由于稳定同位素内标合成过程中不能达到％的同位素纯度，可能会干扰待测物的测定。而待测物的自然同位素分布可能转化为内标，影响内标的测定。本试验所用同位素纯度为93.9％，在试验过程中发现同时存在2[M+H]+峰(m/z)和d8-1[M+H]+峰(m/z

)，因此同时检测这2个稳定同位素峰。结果，空白血浆加入内标溶液样品和LLOQ样品中(R)-1峰面积的比值为0.88％和0.93％，(S)-1峰面积比值分别为1.02％和1.02％，均满足接受标准。由于2含量较高且与待测物1的色谱和质谱行为更接近，故选作内标。

在以LuxCellulose-4手性柱分离1对映体条件的基础上，对另外2个质子泵抑制剂奥美拉唑和兰索拉唑也进行了对映体的色谱分离，监测离子对为m/z.2→m/z.2(奥美拉唑)和m/z.2→m/z.2(兰索拉唑)。结果显示，适当调整缓冲液pH值及有机相比例，本法也适用于奥美拉唑和兰索拉唑对映体的分离。

本法与文献报道方法(表1)相比，血样处理过程简单，灵敏度较高，且色谱运行时间较短。

作者简介：曹晓丽(8—)，女，硕士研究生，专业方向：药物分析及药代动力学。

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